提取DNA基因座亲子鉴定的方法

发布时间:2020-03-04 文章来源:安康生物

    1.利用DNA的溶解性


    DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。利用DNA不溶于酒精溶液,某些蛋白能溶于其中的原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离。


    2.利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没影响,大多数蛋白质不能忍受60--80*C的高温,而DNA在80.C以上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。

提取DNA基因座亲子鉴定的方法

    二、实验设计


    思路:选材--提取--提纯--析出--鉴定;


    1.选材应选用DNA含量相对较高的生物组织,以便于降低实验难度,使得实验成功的可能性更大。


    一般选用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得;二是鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。


    2.提取破碎细胞,获取含DNA的滤液思考:为什么在提取洋葱的DNA时在切碎的洋葱中要加入一定的洗涤剂和食盐?


    洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。


    3.提纯去除滤液中的杂质认真研究教材P55去除杂质的三个方案,对比三个方案的设计原理有什么不同?方案一是利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同,通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质;方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开;方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离。


    4.析出析出DNA,处理后的溶液过滤,加入与滤液等体积、冷却的酒精溶液(体积分数为95%)静置2-3min,溶液中会出现白色丝状物,即粗提到的DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,用滤纸吸去上面的水分。

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