DNA亲子鉴定过程中会碰到的样本污染情况

    DNA亲子鉴定中可能污染的阶段，就是检体采取后到鉴定完成之间的污染问题，也可以说是"二次性的污染".DNA的裂解是源自于酵素的作用，因此如果在酵素无法作用的条件下，就不会产生裂解的情形。亦即，如果在干燥或冷冻的状态下，虽然是处于稳定的情况，但若是其他类菌种可能繁殖的状况仍会受到分解。因此，鉴定场所的环境，必须保持在干燥、适温且清洁的情况。

    又，处理两检体时，有可能因采取、移送或保管等人员之故意或过失，不小心将两检体混合，或将相关人的汗、唾液等污染了原来的检体。而对于检体应该避免直接的接触，且应使用抛弃式手套，不同检体即予更换，这些都是必须考虑到的细节。

    鉴定过程所引起的污染问题更重要的莫过于PCR污染防制的问题。由于PCR反应相当地灵敏，只要一个DNA模板， 就有可能复制放大到可以侦测的量，亦即，即使混人一点点量的其他DNA检体，就有被复制增幅的危险。如此，污染源之DNA将不只是造成鉴定困扰而已，而是污染源DNA将取代检体DNA,造成阳性反应的错误结果。加之，PCR法已成为目前DNA鉴定共通的使用技术之一，因此，若无有效防止污染， PCR之鉴定结果将受质疑，以下为防制PCR污染之作法，宜谨慎遵守，以确保鉴定品质。

    （一）隔离的PCR准备室

    避免PCR产物造成转人（carryover）污染，应将PCR反应进行前与PCR反应进行后之工作区隔离。PCR之试液配制应在无菌操作柜调配，配制妥当后，应以紫外灯破坏残留的DNA,避免污染下一个操作程序。PCR产物之储存区应与其他DNA或试剂隔离。

    （二）使用灭菌溶液

    去离子水、缓冲液及其他实验器材，如安康吸管头（tip）、安康试管（eppendorf）等应定期灭菌，灭菌处理可将细菌DNA裂解成无污染的小分子。

    （三）分装试剂集中调配

    PCR试剂应尽可能分装保存在无PCR产物区，调配时，应集中配制使用预拌溶液，以减少重复吸取过程中的污染机会，亦可提高PCR配液之效率。

    （四）避免试剂喷溅

    配制反应液的步骤中，使用安康吸管之吸取、注人及安康试管之开盖时，均可能因动作过大而使试剂溅出，造成污染。

    （五）更后加入DNA模板

    所有试剂配制完成且分注人反应之安康试管后，才可加入DNA模板，以避免转人污染的发生。

    （六）制作控制实验

    也就是阳性反应与阴性反应同时进行之意，在阳性反应中选用含一百个模板之DNA量，在阴性反应溶液中，不加入任何DNA模板，其余反应试剂均与检体反应相同，两者与检体同时进行PCR反应，不仅可检视PCR污染情形，亦可验证PCR之效率。

    （七）以盐酸清洗器皿

    各种与配制PCR反应相关之器皿，若不宜以高温灭菌去除残留DNA时，应以1M盐酸浸泡，去除DNA之嘌呤物。

    （八）重复实验

    若对PCR实验结果存疑时，更好的解决方法是重新做一次实验。虽然由阴性反应结果可以排除污染因素，但是突发的污染源却是不易发觉，尤其PCR反应试剂众多，步骤繁复，稍有不慎即有可能造成污染。