DNA亲子鉴定过程中会碰到的样本污染情况

发布时间:2020-03-05 文章来源:安康生物

    DNA亲子鉴定中可能污染的阶段,就是检体采取后到鉴定完成之间的污染问题,也可以说是"二次性的污染".DNA的裂解是源自于酵素的作用,因此如果在酵素无法作用的条件下,就不会产生裂解的情形。亦即,如果在干燥或冷冻的状态下,虽然是处于稳定的情况,但若是其他类菌种可能繁殖的状况仍会受到分解。因此,鉴定场所的环境,必须保持在干燥、适温且清洁的情况。


    又,处理两检体时,有可能因采取、移送或保管等人员之故意或过失,不小心将两检体混合,或将相关人的汗、唾液等污染了原来的检体。而对于检体应该避免直接的接触,且应使用抛弃式手套,不同检体即予更换,这些都是必须考虑到的细节。


    鉴定过程所引起的污染问题最重要的莫过于PCR污染防制的问题。由于PCR反应相当地灵敏,只要一个DNA模板, 就有可能复制放大到可以侦测的量,亦即,即使混人一点点量的其他DNA检体,就有被复制增幅的危险。如此,污染源之DNA将不只是造成鉴定困扰而已,而是污染源DNA将取代检体DNA,造成阳性反应的错误结果。加之,PCR法已成为目前DNA鉴定共通的使用技术之一,因此,若无有效防止污染, PCR之鉴定结果将受质疑,以下为防制PCR污染之作法,宜谨慎遵守,以确保鉴定品质。

DNA亲子鉴定过程中会碰到的样本污染情况

    (一)隔离的PCR准备室


    避免PCR产物造成转人(carryover)污染,应将PCR反应进行前与PCR反应进行后之工作区隔离。PCR之试液配制应在无菌操作柜调配,配制妥当后,应以紫外灯破坏残留的DNA,避免污染下一个操作程序。PCR产物之储存区应与其他DNA或试剂隔离。


    (二)使用灭菌溶液


    去离子水、缓冲液及其他实验器材,如微量吸管头(tip)、微量试管(eppendorf)等应定期灭菌,灭菌处理可将细菌DNA裂解成无污染的小分子。


    (三)分装试剂集中调配


    PCR试剂应尽可能分装保存在无PCR产物区,调配时,应集中配制使用预拌溶液,以减少重复吸取过程中的污染机会,亦可提高PCR配液之效率。


    (四)避免试剂喷溅


    配制反应液的步骤中,使用微量吸管之吸取、注人及微量试管之开盖时,均可能因动作过大而使试剂溅出,造成污染。


    (五)最后加入DNA模板


    所有试剂配制完成且分注人反应之微量试管后,才可加入DNA模板,以避免转人污染的发生。


    (六)制作控制实验


    也就是阳性反应与阴性反应同时进行之意,在阳性反应中选用含一百个模板之DNA量,在阴性反应溶液中,不加入任何DNA模板,其余反应试剂均与检体反应相同,两者与检体同时进行PCR反应,不仅可检视PCR污染情形,亦可验证PCR之效率。


    (七)以盐酸清洗器皿


    各种与配制PCR反应相关之器皿,若不宜以高温灭菌去除残留DNA时,应以1M盐酸浸泡,去除DNA之嘌呤物。


    (八)重复实验


    若对PCR实验结果存疑时,最好的解决方法是重新做一次实验。虽然由阴性反应结果可以排除污染因素,但是突发的污染源却是不易发觉,尤其PCR反应试剂众多,步骤繁复,稍有不慎即有可能造成污染。

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