DNA亲子鉴定浅谈各种鉴定方法(多基因位探针,单基因位探针,PCR鉴定法,HLA亲子鉴定分析)

发布时间:2020-03-09 文章来源:安康生物

    1.多基因位探针(multi-locusprobes)(MLP)MLP法是以一个探针(probes)可以检测出20~30条染色带(band),亦即一次分析10~15个基因位,以得到较多的鉴定讯息。然而究竟分析到哪一个基因位亦未必明确。如果严谨地执行品质管理,则检查结果大体上还算稳定,但从基因位无法被特定这-一点来看,MLP法未必适合于作DNA鉴定。不过,在仅有单亲或欠缺双亲的时候,将其作为推定与其他亲族血缘关系的鉴定方法,则是现在最能被信赖的方法。


    2.单基因位探针(single-locusprobes)(SLP)SLP法因为是分析一个特定的基因位,所以跟以往血液型一样可以用来作鉴定。但是,以限制酶切断的染色带片断通常有数千个碱基以上的长度,要严谨地确定其长度是有困难的。因此,一方面要考虑电泳的误差及凝胶(gel)的误差,另一方面推算片断大概的长度再判断染色带位置是否一致,然后统计出现的频率。判定染色带是否一-致、统计出现频率及确认突变几率等评估的方法,必须依学术上已确立者为之。

DNA亲子鉴定浅谈各种鉴定方法(多基因位探针,单基因位探针,PCR鉴定法,HLA亲子鉴定分析)

    3.藉由PCR法在迷你卫星(mini-satellite,亦即VNTR)及微小卫星(micro-satellite,亦即STR)DNA区域反应分析。


    这些是依PCR反应所扩增的基因位来决定,而对偶基因的检测法也要能够明确用来作鉴定。迷你卫星DNA重复的单位本身约有十至数十个碱基,总长如果太长并不适于PCR反应。因此,只有总长较短的基因位才适于作PCR反应。一般而言,迷你卫星DNA虽然对偶基因有很高的特异性,但是因为总长度稍长而有使PCR反应效率降低的危险。


    另一方面,微小卫星DNA重复单位为数个碱基,全长较短适于PCR反应。唯一般微小卫星DNA的对偶基因数目不多,所以为了提高鉴别能力,组合使用数个基因位是有必要的。


    虽然可以用组合阶梯标志(size-marker)来确定对偶基因被扩增的DNA片断全长,但是如能用尸[以夕亍少-marker,则能更正确地确定长度。虽然有时可以看到不规则的对偶基因与尸[少久亏夕-marker不一致的情形,但是希望使用不规则对偶基因出现频率较低的基因位。再者,出现不规则对偶基因时进行全面性的检索,一般是不可避免的,其表示之方法有明示的必要。


    4.HLA分析


    HLA原本是一-种白血球的血液型,用其抗体型别来作鉴定。以DNA来作鉴定虽然有较多的对偶基因能够正确地判定出型别,惟基本上其与判定血液型相同,都可作为鉴定之用。在判定型别方面,有将PCR产物与限制酶反应作用后判定的方法,亦有用特定碱基序列探针的点墨杂交法等,不论何者均得利用之。

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    5.其他PCR鉴定法


    以往的血液型鉴定用DNA更能详细地实行。例如,以ABO血液型为首及其他的血液型别等的DNA分析法已有报告出来,而基因型也可以分析。这些都必须在遵循前述各项注意要点下才可使用。


    粒线体DNA的D-loop区有许多高变异的碱基序列,虽然有利用的可能,但因是母系遗传,并不适用于父子鉴定。


    利用PCR分析迷你卫星DNA重复单位(REPEAT)内变异的MVR-PCR法,虽然只被限于基因位(locus)才能使用,但具有高度的分析能力,未来仍是相当有用的。然而,必须叙明鉴定品质管理的方法后才能被使用。


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