目的观察并分析肯定亲权关系的案件,探索STR**座的突变规律。方法采用Goldeneye20A试剂盒对20723例肯定亲权关系的案件筛选等位**突变事件,统计各**座的突变率和突变等位**的来源、片段大小、突变步数及重复单位的增加或减少情况,分析突变相关因素的特点。结果19个STR**座共发现548例突变,观察到557个突变事件,**座的突变率为0.07‰~2.23‰。
父系突变与母系突变的比例为3.06∶1.突变以一步突变为主,增加与减少重复单位的情况相当;二步以上(含二步)突变更易出现重复单位减少。突变主要发生于中等位**,重复单位增减比例相当,长等位**突变中重复单位减少显着多于增加。
父系突变出现重复单位增加与减少的比例相当,母系突变重复单位减少较增加多见。结论各**座的突变率差异具有统计学意义,当出现1~2个**座不符合遗传规律时,应当加测其他检测系统,并结合突变**座的信息计算PI值,以进一步明确鉴定意见。
短串联重复序列(STR)**座是目前更常用的亲权鉴定遗传标记,具有多态性高、个体识别能力强、非父排除概率高、突变率高等特点。其中,STR发生突变可能使亲权鉴定面临错判的风险,因而有必要对STR**座的突变规律与特点有所认识。本研究通过大量样本检测,对目前常用的Goldeneye20A检测系统中观察到的突变规律及特点进行分析。
亲子鉴定材料与方法
1.亲子鉴定样本
本中心日常检案中肯定亲权的案件20723例,均为北方汉族人群,样本类型有血斑、口腔拭子、带毛囊的毛发、无创亲子鉴定、精斑、组织等。
2.DNA亲子鉴定提取和STR分型
采用Chelex-100法提取样本DNA,经Goldeneye20A试剂盒扩增,扩增体系和扩增条件按试剂盒说明书进行。扩增产物在3130xl型**分析仪(美国ThermoFisher公司)上进行电泳,采用GeneMapper?ID-X软件进行**分型。
3.亲子鉴定突变等位**的确定
从有下述特点的案例中识别突变的等位**:19个STR**座安康出1~2个不符合孟安康遗传定律的**座,增加检测STRtyper-10G试剂盒,未再出现新的不符合遗传规律的**座,且累积亲权指数(CPI)大于10000;出现新的不符合遗传规律的**座,增加检测Goldeneye22NC试剂盒,若被检子代为女性,对被检父母与女孩再增加检测Goldeneye17X试剂盒,若被检子代为男性,对被检父与男孩增加检验YfilerPlus试剂盒(美国ThermoFisher公司),未再出现不符合遗传规律的**座,且CPI值大于10000.在满足上述条件下,对于不符合孟安康遗传规律的**座,视为突变**座,并判断突变的来源。对于亲代和子代均为纯合子的突变**座,换用其他试剂盒(如Globalfiler系统)进行复核,以排除无效**并验证分型。
将每个**座等位**按片段大小(取决于重复次数的多少)从小到大排列,排列在前面25%的判断为短等位**,中间50%判断为中等位**,后面25%判断为长等位**。
4.亲子鉴定统计学分析
对突变**座的数量、突变来源、突变步数、突变等位**的片段大小及重复单位的增加或减少进行统计,通过直接计数法得到突变**座的突变率;分析突变来源、突变步数、突变等位**片段大小在整体突变事件中所占比例,并通过SPSS19.0软件进行统计,分析上述突变相关因素之间的关系,检验水准α=0.05.
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